ISO 3990:2023
(Main)Dentistry — Evaluation of antibacterial activity of dental restorative materials, luting materials, fissure sealants and orthodontic bonding or luting materials
Dentistry — Evaluation of antibacterial activity of dental restorative materials, luting materials, fissure sealants and orthodontic bonding or luting materials
This document specifies test methods for the evaluation of dental restorative materials, luting materials, fissure sealants and orthodontic bonding or luting materials that are claimed by their respective manufacturers to exert “antibacterial” effects. NOTE Materials for pulp capping (e.g. calcium hydroxide formulations), endodontic filling materials, dental implants or implant systems, nightguards and additive manufactured (e.g. 3D-printed) materials are not covered in this document. This document does not cover tests on the effectiveness of sterilization or disinfection procedures. This document cannot be used to demonstrate a lack of microbial contamination of medical devices used in dentistry.
Médecine bucco-dentaire — Évaluation de l'activité antibactérienne des matériaux de restauration dentaire, matériaux de scellement, produits de comblement des fissures et matériaux de collage ou de scellement orthodontiques
Le présent document spécifie les méthodes d’essai pour l'évaluation des matériaux de restauration dentaire, matériaux de scellement, produits de comblement des fissures et matériaux de collage ou de scellement orthodontiques qui sont revendiqués par leurs fabricants respectifs pour exercer des effets «antibactériens». NOTE Les matériaux de coiffage pulpaire (par exemple, formulations à base d'hydroxyde de calcium), les matériaux de remplissage endodontiques, les implants ou systèmes d’implants dentaires, les gouttières et les matériaux produits par fabrication additive (par exemple, par impression 3D) ne sont pas couverts par le présent document. Le présent document ne couvre pas les essais portant sur l’efficacité des modes opératoires de stérilisation ou de désinfection. Il ne peut pas être utilisé pour prouver l’absence de contamination microbienne des dispositifs médicaux utilisés en médecine bucco-dentaire.
General Information
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 3990
First edition
2023-07
Dentistry — Evaluation of
antibacterial activity of dental
restorative materials, luting materials,
fissure sealants and orthodontic
bonding or luting materials
Médecine bucco-dentaire — Évaluation de l'activité antibactérienne
des matériaux de restauration dentaire, matériaux de scellement,
produits de comblement des fissures et matériaux de collage ou de
scellement orthodontiques
Reference number
© ISO 2023
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Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Requirements . 2
4.1 General . 2
4.2 Extract . . . 2
4.3 Direct contact . 2
5 Sample preparation and control material preparation . 3
5.1 General . 3
5.2 General requirements and recommendations for sample preparation . 3
5.3 Specific requirements and recommendations for light-curing materials . 4
5.4 Specific requirements and recommendations for chemically setting materials . 4
5.5 Specific requirements and recommendations for CAD/CAM milled or subtractive
manufactured materials . 5
5.6 Sterility of samples . 5
5.7 Preparation of liquid extracts of material . 5
5.7.1 Principles of extraction . 5
5.7.2 Extraction vehicle . 6
5.7.3 Extraction conditions . . 6
5.7.4 Consecutive elution cycles . 6
5.8 Preparation of materials for direct contact tests . 7
5.8.1 Form of samples . 7
5.8.2 Principles of direct contact tests . 7
6 Bacterial strains, nutrient broths and preparation of bacterial cultures .8
7 Test procedures . 8
7.1 General . 8
7.2 Test on extracts . . 9
7.2.1 Tests on extracts toward planktonic cultures of bacteria . 9
7.2.2 Test on extracts toward bacterial biofilms. 10
7.3 Test by direct contact . 11
7.3.1 Test by direct contact toward planktonic cultures of bacteria . 11
7.3.2 Test by direct contact toward bacterial biofilms .12
7.4 Determination of antibacterial effects . 13
7.4.1 General .13
7.4.2 A ssessment of the reduction of the bacterial ability to replicate .13
7.4.3 A ssessment of bacterial membrane damage . 14
7.4.4 A ssessment of the reduction in bacterial metabolic activity . 16
8 A ssessment of results .17
9 Final test report .17
Annex A (informative) Bacterial strains and corresponding nutrient broths .19
Bibliography .21
iii
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use
of (a) patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed
patent rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received
notice of (a) patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are
cautioned that this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent
database available at www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all
such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 106, Dentistry, in collaboration with
the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 55, Dentistry, in
accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
Introduction
Due to the general applicability of in vitro tests for antibacterial activity and their widespread use in
evaluating a large range of dental materials, it is the purpose of this document to define a scheme for
testing which requires decisions to be made in a series of steps rather than to specify a single test. This
should lead to the selection of the most appropriate test for a respective dental material to be evaluated.
Two categories of test are listed: extract test and direct contact test.
The choice of one or more of these categories depends upon the nature of the material to be evaluated,
the potential site of use and the nature of the use of the respective material. Extract tests are primarily
directed to substances leaching out from materials, whereas direct contact tests are directed to both,
effects from leachable substances and surface effects. The choice of test then determines the details of
the preparation of the samples to be tested, the preparation of the cultured bacteria or biofilms, and the
way in which the bacteria or biofilms are exposed to the samples or their extracts.
Both categories of tests are intended to be first conducted toward planktonic cultures of bacteria and
then, in case of positive results, toward bacterial biofilms.
This document proposes measurement of reduction of bacterial ability to replicate as the main method
to assess antibacterial effects. Additionally, bacterial membrane damage can be assessed in order to
further verify bacterial cell death and reductions in bacterial metabolic activity can be investigated as
another measure of bacterial viability.
There are several means of producing results in each of these test categories. The investigator should
be aware of the test categories and into which category a particular technique fits, in order to ensure
the comparability with other results on similar materials both at the intra- and interlaboratory level.
Examples of quantitative test protocols for assessing reduction of bacterial ability to replicate by colony
forming units (CFU) assay and for assessing bacterial membrane damage by flow cytometry and for
investigating reductions in bacterial metabolic activity by MTT assay are given in this document along
with guidance for the interpretation of the results.
v
INTERNATIONAL STANDARD ISO 3990:2023(E)
Dentistry — Evaluation of antibacterial activity of dental
restorative materials, luting materials, fissure sealants and
orthodontic bonding or luting materials
1 Scope
This document specifies test methods for the evaluation of dental restorative materials, luting
materials, fissure sealants and orthodontic bonding or luting materials that are claimed by their
respective manufacturers to exert “antibacterial” effects.
NOTE Materials for pulp capping (e.g. calcium hydroxide formulations), endodontic filling materials, dental
implants or implant systems, nightguards and additive manufactured (e.g. 3D-printed) materials are not covered
in this document.
This document does not cover tests on the effectiveness of sterilization or disinfection procedures. This
document cannot be used
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 3990
Première édition
2023-07
Médecine bucco-dentaire —
Évaluation de l'activité
antibactérienne des matériaux de
restauration dentaire, matériaux de
scellement, produits de comblement
des fissures et matériaux de collage ou
de scellement orthodontiques
Dentistry — Evaluation of antibacterial activity of dental restorative
materials, luting materials, fissure sealants and orthodontic bonding
or luting materials
Numéro de référence
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© ISO 2023
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être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 2
4 Exigences . 2
4.1 Généralités . 2
4.2 Extrait . . 2
4.3 Contact direct . 3
5 Préparation de l’échantillon et du matériau de contrôle . 3
5.1 Généralités . 3
5.2 Exigences générales et recommandations pour la préparation des échantillons . 4
5.3 Exigences spécifiques et recommandations pour les matériaux
photopolymérisables. 4
5.4 Exigences spécifiques et recommandations pour les matériaux à polymérisation
chimique . 5
5.5 Exigences spécifiques et recommandations pour les matériaux de CFAO fraisés ou
produits par fabrication soustractive . 5
5.6 Stérilité des échantillons . 5
5.7 Préparation des extraits liquides de matériau . 6
5.7.1 Principes d'extraction. 6
5.7.2 Milieu d’extraction . 6
5.7.3 Conditions d'extraction . 6
5.7.4 Cycles d’élution consécutifs . 7
5.8 Préparation des matériaux pour les essais en contact direct . 7
5.8.1 Forme des échantillons . 7
5.8.2 Principes des essais par contact direct . 8
6 Souches bactériennes, bouillons nutritifs et préparation des cultures bactériennes .8
7 Modes opératoires d’essai .9
7.1 Généralités . 9
7.2 Essais sur extraits . 9
7.2.1 Essais sur extraits vis-à-vis des cultures bactériennes planctoniques . 9
7.2.2 Essais sur extraits vis-à-vis des biofilms bactériens . 10
7.3 Essai par contact direct .12
7.3.1 Essai par contact direct vis-à-vis des cultures bactériennes planctoniques .12
7.3.2 Essai par contact direct vis-à-vis des biofilms bactériens .13
7.4 Détermination des effets antibactériens . 14
7.4.1 Généralités . 14
7.4.2 Évaluation de la réduction de la capacité bactérienne à répliquer . 14
7.4.3 Évaluation de l’endommagement de la membrane bactérienne .15
7.4.4 Évaluation de la réduction de l’activité métabolique bactérienne . 17
8 Interprétation des résultats .18
9 Rapport d’essai final .18
Annexe A (informative) Souches bactériennes et bouillons nutritifs correspondants .20
Bibliographie .21
iii
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner
l’utilisation d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et
à l’applicabilité de tout droit de propriété revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent
document, l’ISO n'avait pas reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa
mise en application. Toutefois, il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent
document que des informations plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de
brevets, disponible à l'adresse www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié tout ou partie de tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir: www.iso.org/avant-propos.html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 106, Médecine bucco-dentaire, en
collaboration avec le comité technique CEN/TC 55, Médecine bucco-dentaire, du Comité européen de
normalisation (CEN), conformément à l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord
de Vienne).
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
Introduction
En raison de l’applicabilité générale des essais in vitro pour l’activité antibactérienne et de leur
utilisation courante pour l’évaluation d’une vaste gamme de matériaux dentaires, l’objet du présent
document est de définir un schéma des essais qui nécessite la prise de décisions concernant une série
de phases plutôt que de spécifier un essai unique. Cette démarche devrait mener à la sélection de l'essai
le plus approprié pour un matériau dentaire à évaluer.
Deux catégories d’essai sont répertoriées: l’essai sur extrait et l’essai par contact direct.
Le choix d'une ou de plusieurs de ces catégories dépend de la nature du matériau à évaluer, du site
d'utilisation potentiel et de la nature de l'utilisation du matériau correspondant. Les essais sur extraits
concernent principalement les substances relarguées par les matériaux, tandis que les essais par
contact direct concernent aussi bien les effets dus aux substances relargables que les effets en surface.
Le choix de l’essai détermine alors les détails de la préparation des échantillons à soumettre à essai, de
la préparation des bactéries cultivées ou des biofilms, et la façon dont les bactéries ou les biofilms sont
exposés aux échantillons ou à leurs extraits.
Les deux catégories d’essai sont destinées à être réalisées d’abord sur des cultures planctoniques de
bactéries puis, en cas de résultats positifs, sur des biofilms bactériens.
Le présent document propose de mesurer la réduction de la capacité bactérienne à répliquer en tant que
méthode principale d’évaluation des effets antibactériens. De plus, l’endommagement de la membrane
bactérienne peut être évalué afin de vérifier que la cellule bactérienne est morte et les réductions de
l’activité métabolique bactérienne peuvent être étudiées en tant que mesure supplémentaire de la
viabilité bactérienne.
Il existe plusieurs moyens d'obtenir des résultats dans chacune de ces catégories d’essai. Afin de
s’assurer de la comparabilité avec d'autres résultats intra- et interlaboratoires sur des matériaux
similaires, il convient que l'investigateur connaisse les catégories d'essai auxquelles chaque technique
particulière appartient.
Le présent document donne des exemples de protocoles d'essai quantitatif pour évaluer la réduction
de la capacité bactérienne à répliquer par dosage des unités formant colonies (UFC), et pour évaluer
l’endommagement de la membrane bactérienne par cytométrie en flux et pour étudier les réductions
de l’activité métabolique bactérienne par test MTT. Il fournit également des recommandations pour
l’interprétation des résultats.
v
NORME INTERNATIONALE ISO 3990:2
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.