SIST ISO 22030:2006

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 22030
First edition
2005-02-01
Soil quality — Biological methods —
Chronic toxicity in higher plants
Qualité du sol — Méthodes biologiques — Toxicité chronique sur les
plantes supérieures
Reference number
©
ISO 2005
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Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope. 1
2 Normative references. 1
3 Terms and definitions. 2
4 Principle. 4
5 Materials. 4
5.1 Test plants. 4
5.2 Soil and soil storage . 4
5.2.1 General. 4
5.2.2 Test soil. 5
5.2.3 Control soil. 5
5.3 Reference substance. 6
6 Apparatus. 6
7 Methods. 8
7.1 Experimental design. 8
7.2 Pre-test. 8
7.3 Preliminary test (range-finding). 8
7.4 Final test. 9
7.5 Preparation of the pots. 9
7.6 Preparation of the seeds . 9
7.7 Growth conditions. 9
7.8 Start of the test. 10
7.9 Handling during the test. 10
7.9.1 Number of plants and thinning out . 10
7.9.2 Watering. 10
7.9.3 Rearrangement of test vessels. 10
7.9.4 Pollination. 10
7.9.5 Reporting. 11
7.10 Endpoint measurements. 11
7.10.1 Seedling emergence. 11
7.10.2 Harvest at day 14. 11
7.10.3 Final harvest. 11
7.11 Summary and timetable of the test . 12
8 Validity criteria. 13
9 Assessment of the results . 13
9.1 Presentation of measured data . 13
9.2 Statistical analysis. 14
9.2.1 Preliminary test. 14
9.2.2 Final test. 14
9.2.3 NOEC (no observed effect concentration) approach . 14
9.2.4 EC (effect concentration) approach. 14
x
10 Test report. 15
Annex A (informative) Testing of chemicals in soil . 16
Bibliography . 17

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 22030 was prepared by Technical Committee ISO/TC 190, Soil quality, Subcommittee SC 4, Biological
methods.
iv © ISO 2005 – All rights reserved

Introduction
This International Standard describes a procedure for evaluating the quality of soils of different origin carrying
unknown contaminations. The method, slightly modified, can also be used to measure the toxicity of known
chemicals incorporated into soil.
The evaluation of the inhibition and chronic toxicity is based on emergence, vegetative growth and
reproductive capacity of at least two species of higher plants.
This International Standard is based on:
a) results of the research project “Development of a chronic bioassay using higher plants”, sponsored by the
[3]
German Ministry for Education and Research (BMBF), Bonn , and
b) discussions within the joint project “Ecotoxicological Test Batteries” forming part of the BMBF Joint
[10]
Research Group “Processes for the Bioremediation of Soil” .

INTERNATIONAL STANDARD ISO 22030:2005(E)

Soil quality — Biological methods — Chronic toxicity in higher
plants
WARNING — Contaminated soils can contain unknown mixtures of toxic, mutagenic or otherwise
harmful chemicals or infectious microorganisms. Occupational health risks can arise from dust or
evaporated chemicals during handling and incubation. Furthermore, test plants can absorb chemicals
from the soil and safety measures should also be considered when handling these test plants.
1 Scope
This International Standard describes a method for determining the inhibition of the growth and reproductive
capability of higher plants by soils under controlled conditions. Two species are recommended: a rapid-cycling
variant of turnip rape (Brassica rapa CrGC syn. Rbr) and oat (Avena sativa). The duration of test should be
sufficient to include chronic endpoints that demonstrate the reproductive capability of the test plants.
By using natural test soils, e.g. from contaminated sites or remediated soils, and by comparing the
development of the test plants in these soils with reference or standard control soils, the test can be used to
assess soil quality, especially the function of the soil as a habitat for plants.
Annex A describes modifications allowing use of the chronic plant assay for the testing of chemicals
incorporated into soil. By preparing a dilution series of a test substance in standard control soils, the same
endpoints can be measured to assess the chronic toxicity of chemicals. This method is not applicable to
volatile substances, i.e. substances for which H (Henry’s constant) or the air/water partition coefficient is
greater than 1, or for which the vapour pressure exceeds 0,013 3 Pa at 25 °C.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 11268-1:1993, Soil quality — Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida) — Part 1: Determination
of acute toxicity using artificial soil substrate
ISO 11268-2:1998, Soil quality — Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida) — Part 2: Determination
of effects on reproduction
ISO 11269-2, Soil quality — Determination of the effects of pollutants on soil flora — Part 2: Effects of
chemicals on the emergence and growth of higher plants
ISO 15176:2002, Soil quality — Characterization of excavated soil and other soil materials intended for re-use
ISO 15799, Soil quality — Guidance on the ecotoxicological characterization of soils and soil materials
ASTM D1076:2002, Standard Specification for Rubber-Concentrated, Ammonia Preserved, Creamed, and
Centrifuged Natural Latex
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
artificial soil
mixture of sand, kaolinite, peat and calcium carbonate
NOTE ISO 11268-1 describes such a soil for toxicity tests using earthworms. Pure quartz sand, mineral wool,
vermiculite or other synthetic substrates should not be used.
3.2
biomass
total mass of shoots, flowers and seed pods
NOTE 1 Biomass is expressed as dry mass per plant or, if needed, as dry mass per pot.
NOTE 2 During the test period, some of the test plants can reach different growth stages and their water content can
differ wh
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 22030
Première édition
2005-02-01
Qualité du sol — Méthodes
biologiques — Toxicité chronique sur les
plantes supérieures
Soil quality — Biological methods — Chronic toxicity in higher plants

Numéro de référence
©
ISO 2005
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Publié en Suisse
ii © ISO 2005 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe. 4
5 Matériaux. 4
5.1 Plantes testées. 4
5.2 Sol et stockage du sol . 5
5.2.1 Généralités. 5
5.2.2 Sol d’essai. 5
5.2.3 Sol témoin. 6
5.3 Substance de référence. 7
6 Équipement. 7
7 Méthodes. 9
7.1 Montage expérimental. 9
7.2 Essai préalable. 9
7.3 Essai préliminaire (détermination de la plage de concentrations) . 9
7.4 Essai final. 9
7.5 Préparation des pots . 9
7.6 Préparation des graines . 10
7.7 Conditions de croissance . 10
7.8 Début de l’essai. 10
7.9 Manipulation au cours de l’essai. 11
7.9.1 Nombre de plantes et éclaircissage. 11
7.9.2 Arrosage. 11
7.9.3 Nouvelle disposition des récipients d’essai . 11
7.9.4 Pollinisation. 11
7.9.5 Compte rendu. 11
7.10 Mesure des points de mesure . 12
7.10.1 Germination de plantules. 12
ème
7.10.2 Récolte au 14 jour . 12
7.10.3 Récolte finale. 12
7.11 Récapitulatif et calendrier de l’essai. 13
8 Critères de validité . 14
9 Évaluation des résultats. 14
9.1 Présentation des mesures . 14
9.2 Analyse statistique. 15
9.2.1 Essai préliminaire. 15
9.2.2 Essai final. 15
9.2.3 Approche CSEO (concentration sans effet observé) . 15
9.2.4 Approche CE (concentration avec effet) . 15
x
10 Rapport d'essai. 16
Annexe A (informative) Essais des produits chimiques dans le sol. 17
Bibliographie . 18
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 22030 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 190, Qualité du sol, sous-comité SC 4, Méthodes
biologiques.
iv © ISO 2005 – Tous droits réservés

Introduction
La présente Norme internationale décrit une méthode d’évaluation de la qualité des sols d’origine diverse
présentant des contaminations inconnues. Légèrement modifiée, la méthode peut également être utilisée pour
mesurer la toxicité de produits chimiques connus incorporés dans le sol.
L’évaluation de l’inhibition et de la toxicité chronique repose sur la germination, la croissance végétative et la
capacité de reproduction d’au moins deux espèces de plantes supérieures.
La présente Norme internationale se fonde sur
a) les résultats du projet de recherche «Développement d’un bio-essai chronique à l’aide de plantes
[3]
supérieures» parrainé par le Ministère allemand de l’éducation et de la recherche (BMBF) , et
b) les discussions menées dans le cadre du projet commun «Batteries d’essai écotoxicologiques» au sein
[10]
du Groupe de recherche commun du BMBF «Procédés de bioréhabilitation du sol» .

NORME INTERNATIONALE ISO 22030:2005(F)

Qualité du sol — Méthodes biologiques — Toxicité chronique
sur les plantes supérieures
AVERTISSEMENT — Les sols contaminés peuvent contenir des mélanges inconnus de produits
chimiques toxiques, mutagènes ou de nocivité autre ou des micro-organismes infectieux. La
poussière ou les produits chimiques qui en émanent au cours de la manipulation et de l’incubation
peuvent engendrer des risques pour la santé sur les lieux de travail. De plus, les plantes testées
pourraient absorber des produits chimiques provenant du sol et il convient également d’envisager de
prendre des mesures de sécurité lors de la manipulation de ces plantes.
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale décrit une méthode de détermination de l’inhibition de la croissance et de la
capacité de reproduction des plantes supérieures par les sols dans des conditions contrôlées. Deux espèces
sont recommandées: une variante de colza à cycle rapide (Brassica rapa CrGC syn. Rbr) et l’avoine (Avena
sativa). Il convient que la durée de l’essai soit suffisante pour inclure les points de mesure chroniques qui
apportent la preuve de la capacité de reproduction des plantes soumises à l'essai.
En utilisant des sols d’essai naturels provenant, par exemple, de sites contaminés ou de sols réhabilités, et en
comparant le développement des plantes testées dans ces sols à celui des plantes testées dans les sols de
référence ou les sols témoins standard, l’essai peut permettre d’évaluer la qualité du sol, notamment sa
fonction d’habitat des plantes.
L’Annexe A décrit des modifications permettant d’exploiter l’analyse chronique des plantes pour les essais de
substances ou de produits chimiques incorporés dans le sol. En préparant une série de dilutions d’une
substance dans des sols témoins standard, il est possible de déterminer les mêmes points de mesure afin
d’évaluer la toxicité chronique de ces substances ou de ces produits chimiques. Cette méthode n’est pas
applicable aux substances volatiles, c’est-à-dire celles pour lesquelles H (constante de Henry) ou le
coefficient de partage air/eau est supérieur à 1, ou pour lesquelles la pression de vapeur à 25 °C est
supérieure à 0,013 3 Pa à 25 °C.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 11268-1:1993, Qualité du sol — Effets des polluants vis-à-vis des vers de terre (Eisenia fetida) —
Partie 1: Détermination de la toxicité aiguë en utilisant des substrats de sol artificiel
ISO 11268-2:1998, Qualité du sol — Effets des polluants vis-à-vis des vers de terre (Eisenia fetida) —
Partie 2: Détermination des effets sur la reproduction
ISO 11269-2, Qualité du sol — Détermination des effets des polluants sur la flore du sol — Partie 2: Effets
des substances chimiques sur l'émergence et la croissance des végétaux supérieurs
ISO 15176:2002, Qualité du sol — Caractérisation de la te
...