ISO/TS 2963:2006
(Main)Cheese and processed cheese products — Determination of citric acid content — Enzymatic method
Cheese and processed cheese products — Determination of citric acid content — Enzymatic method
ISO/TS 2963|IDF/RM 34:2006 specifies an enzymatic method for the determination of the citric acid content of cheese and processed cheese products.
Fromages et fromages fondus — Détermination de la teneur en acide citrique — Méthode enzymatique
L'ISO/TS 2963|FIL/RM 34:2006 internationale spécifie une méthode enzymatique pour la détermination de la teneur en acide citrique des fromages et des fromages fondus.
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TECHNICAL ISO/TS
SPECIFICATION 2963
IDF/RM
First edition
2006-05-01
Cheese and processed cheese
products — Determination of citric acid
content — Enzymatic method
Fromages et fromages fondus — Détermination de la teneur en acide
citrique — Méthode enzymatique
Reference numbers
IDF/RM 34:2006(E)
©
ISO and IDF 2006
IDF/RM 34:2006(E)
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© ISO and IDF 2006
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Published in Switzerland
ii © ISO and IDF 2006 – All rights reserved
IDF/RM 34:2006(E)
Contents Page
Foreword. iv
Foreword. v
Introduction . vi
1 Scope . 1
2 Terms and definitions. 1
3 Principle. 1
4 Reagents. 1
5 Apparatus . 3
6 Sampling. 3
7 Preparation of test sample. 3
8 Procedure . 4
8.1 Check tests. 4
8.2 Test portion . 4
8.3 Reagent blank test. 4
8.4 Deproteination. 5
8.5 Determination. 5
9 Calculation and expression of results. 6
9.1 Calculation. 6
9.2 Expression of results . 7
10 Precision. 7
10.1 Interlaboratory test . 7
10.2 Repeatability. 7
10.3 Reproducibility. 7
11 Test report . 7
Annex A (normative) Good Laboratory Practice (GLP) rules for the performance of enzymatic
analyses. 8
Bibliography . 12
IDF/RM 34:2006(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a
technical committee may decide to publish other types of normative document:
— an ISO Publicly Available Specification (ISO/PAS) represents an agreement between technical experts in
an ISO working group and is accepted for publication if it is approved by more than 50 % of the members
of the parent committee casting a vote;
— an ISO Technical Specification (ISO/TS) represents an agreement between the members of a technical
committee and is accepted for publication if it is approved by 2/3 of the members of the committee casting
a vote.
An ISO/PAS or ISO/TS is reviewed after three years in order to decide whether it will be confirmed for a
further three years, revised to become an International Standard, or withdrawn. If the ISO/PAS or ISO/TS is
confirmed, it is reviewed again after a further three years, at which time it must either be transformed into an
International Standard or be withdrawn.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 2963⎪IDF/RM 34 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee
SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO
and IDF.
This edition of ISO/TS 2963⎪IDF/RM 34 cancels and replaces ISO 2963:1997, which has been technically
revised.
iv © ISO and IDF 2006 – All rights reserved
IDF/RM 34:2006(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in the development of
standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the National Committees for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of the IDF National Committees
casting a vote.
In other circumstances, particularly when there is an urgent market requirement for such documents, a
Standing Committee may decide to publish an other type of normative document which is called by IDF:
Reviewed method. Such a method represents an agreement between the members of a Standing Committee
and is accepted for publication if it is approved by at least 50 % of the committee members casting a vote.
A Reviewed method is equal to an ISO/PAS or ISO/TS and will, therefore, also be published jointly under ISO
conditions.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO/TS 2963⎪IDF/RM 34 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical Committee
ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published jointly by IDF
and ISO.
All work was carried out by the Joint ISO-IDF Action Team on Lactose and lactate determination, of the
Standing Committee on Main components of milk, under the aegis of its project leader, Mr C. Hughes (NZ).
This edition of ISO/TS 2963⎪IDF/RM 34 cancels and replaces IDF 34C:1992, which has been technically
revised.
IDF/RM 34:2006(E)
Introduction
The method described in ISO 2963:1997 and IDF 34C:1992 did not fulfil the requirements for a fully validated
International Standard. No new interlaboratory tests could be organized with the method according to
ISO 5725-1 and ISO 5725-2 due to a lack of participants, hence the publication of this revision as a Technical
Specification/Reviewed method.
Reliable results with enzymatic methods will only be obtained if the good laboratory practice (GLP) rules for
such analyses are applied strictly. These GLP rules are given in Annex A.
vi © ISO and IDF 2006 – All rights reserved
TECHNICAL SPECIFICATION
IDF/RM 34:2006(E)
Cheese and processed cheese products — Determination of
citric acid content — Enzymatic method
1 Scope
This Technical Specification specifies an enzymatic method for the determination of the citric acid content of
cheese and processed cheese products.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
citric acid content
mass fraction of substances determined by the procedure described in this Technical Specification
NOTE The citric acid content is expressed as mass fraction in percent.
3 Principle
An extract of the sample is treated with the following enzymes and biochemical substances:
a) citrate lyase (CL) to convert citric acid to oxalacetate and acetate;
b) malate dehydrogenase (MDH) and lactate dehydrogenase (LDH), in the presence of reduced
nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), to catalyse the reduction of oxalacetate and its
decarboxylation product pyruvate to L-malate and L-lactate, respectively, with the subsequent conversion
+
of NADH to its oxidized form (NAD ).
The decrease in concentration of NADH is determined by measurement of the absorbance of the test solution
at 340 nm. The citric acid content is proportional to the decrease in NADH concentration.
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade and distilled water or water of at least equivalent purity,
unless otherwise specified. Take note of the production and expiry dates given by the manufacturer of the
reagents.
4.1 Enzymes
If an enzyme suspension is applied with other than the prescribed activity, the volume of the suspension
stated in the pipetting scheme (8.5.1) shall be increased or decreased proportionally.
The reagents described in 4.7 to 4.10 inclusive may be obtained commercially as a test combination.
4.2 Trichloroacetic acid solution (CCl COOH).
Dissolve 200,0 g of trichloroacetic acid in water. Dilute to 1 000 ml with water and mix.
IDF/RM 34:2006(E)
4.3 Sodium hydroxide solution I, c(NaOH) = 5,0 mol/l.
Dissolve 200,0 g of sodium hydroxide in water. Dilute to 1 000 ml with water and mix.
4.4 Sodium hydroxide solution II, c(NaOH) = 1,0 mol/l.
Dissolve 40,0 g of sodium hydroxide in water. Dilute to 1 000 ml with water and mix.
4.5 Sodium hydroxide solution III, c(NaOH) = 0,1 mol/l.
Dissolve 4,0 g of sodium hydroxide in water. Dilute to 1 000 ml with water and mix.
4.6 Zinc chloride solution, c(ZnCl ) = 800 mg/l.
Dissolve 800 mg of zinc chloride in water. Dilute to 1 000 ml with water and mix.
4.7 Buffer solution, pH 7,8.
Dissolve 71,3 g of glycylglycine in about 700 ml of water. Adjust to
...
SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 2963
FIL/MR
Première édition
2006-05-01
Fromages et fromages fondus —
Détermination de la teneur en acide
citrique — Méthode enzymatique
Cheese and processed cheese products — Determination of citric acid
content — Enzymatic method
Numéros de référence
FIL/MR 34:2006(F)
©
ISO et FIL 2006
FIL/MR 34:2006(F)
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© ISO et FIL 2006
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soit de l'ISO, soit de la FIL à l’adresse respective ci-après.
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Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
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Publié en Suisse
ii © ISO et FIL 2006 – Tous droits réservés
FIL/MR 34:2006(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Avant-propos. v
Introduction . vi
1 Domaine d'application. 1
2 Termes et définitions. 1
3 Principe. 1
4 Réactifs . 1
5 Appareillage . 3
6 Échantillonnage . 3
7 Préparation de l’échantillon pour essai. 4
8 Mode opératoire . 4
8.1 Essais de contrôle . 4
8.2 Prise d’essai . 5
8.3 Essai à blanc du réactif. 5
8.4 Défécation. 5
8.5 Détermination. 5
9 Calculs et expression des résultats. 7
9.1 Calculs . 7
9.2 Expression des résultats . 7
10 Fidélité . 8
10.1 Essai interlaboratoires . 8
10.2 Répétabilité. 8
10.3 Reproductibilité. 8
11 Rapport d’essai . 8
Annexe A (normative) Bonnes pratiques de laboratoire (BPL) relatives aux analyses
enzymatiques . 9
Bibliographie . 13
© ISO et FIL 2006 – Tous droits réservés iii
FIL/MR 34:2006(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
Dans d'autres circonstances, en particulier lorsqu'il existe une demande urgente du marché, un comité
technique peut décider de publier d'autres types de documents normatifs:
— une Spécification publiquement disponible ISO (ISO/PAS) représente un accord entre les experts dans
un groupe de travail ISO et est acceptée pour publication si elle est approuvée par plus de 50 % des
membres votants du comité dont relève le groupe de travail;
— une Spécification technique ISO (ISO/TS) représente un accord entre les membres d'un comité technique
et est acceptée pour publication si elle est approuvée par 2/3 des membres votants du comité.
Une ISO/PAS ou une ISO/TS fait l'objet d'un examen après trois ans afin de décider si elle est confirmée pour
trois nouvelles années, révisée pour devenir une Norme internationale, ou annulée. Lorsqu'une ISO/PAS ou
une ISO/TS a été confirmée, elle fait l'objet d'un nouvel examen après trois ans qui décidera soit de sa
transformation en Norme internationale, soit de son annulation.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO/TS 2963⎪FIL/MR 34 a été élaborée par l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et
produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL). Elle est publiée conjointement par l’ISO et la
FIL.
Cette édition de l'ISO/TS 2963⎪FIL/MR 34 annule et remplace l’ISO 2963:1997, qui a fait l'objet d'une révision
technique.
iv © ISO et FIL 2006 – Tous droits réservés
FIL/MR 34:2006(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
national dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité national a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l’ISO pour
l’élaboration de méthodes normalisées d’analyse et d’échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les Équipes d’action et les Comités permanents sont soumis aux Comités
nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 50 % au moins
des Comités nationaux votants.
Dans d'autres circonstances, en particulier lorsqu'il existe une demande urgente du marché, un Comité
permanent peut décider de publier un autre type de document normatif, désigné par la FIL: Méthode révisée.
Cette méthode est le fruit d’un accord entre les membres d’un Comité permanent, et elle est acceptée pour
publication si elle est approuvée par 50 % au moins des membres votants du comité. Une Méthode révisée
équivaut à une ISO/PAS ou à une ISO/TS et sera donc également publiée conjointement dans les conditions
de l’ISO.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO/TS 2963⎪FIL/MR 34 a été élaborée par la Fédération internationale de laiterie (FIL) et l’ISO/TC 34,
Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publiée conjointement par la FIL et
l’ISO.
L’ensemble des travaux a été confié à l’Équipe d’action mixte ISO-FIL, Dosage du lactose et du lactate du
Comité permanent Principaux composants du lait, sous la conduite de son chef de projet, Monsieur
C. Hughes (NZ).
Cette édition de l'ISO/TS 2963⎪FIL/MR 34 annule et remplace la FIL 34C:1992, qui a fait l'objet d'une révision
technique.
© ISO et FIL 2006 – Tous droits réservés v
FIL/MR 34:2006(F)
Introduction
La méthode décrite dans l’ISO 2963:1997 et la FIL 34C:1992 ne satisfaisait pas aux exigences d’une Norme
internationale dûment validée. Il n’a pas été possible d’organiser de nouveaux essais interlaboratoires avec la
méthode selon l’ISO 5725-1 et l’ISO 5725-2 par manque de participants, d’où la publication en tant que
Spécification technique/Méthode révisée.
Des résultats fiables ne seront obtenus avec les méthodes enzymatiques que si les règles de bonnes
pratiques de laboratoire concernant ce type d’analyses sont strictement appliquées. Ces règles sont indiquées
en Annexe A.
vi © ISO et FIL 2006 – Tous droits réservés
SPÉCIFICATION TECHNIQUE
FIL/MR 34:2006(F)
Fromages et fromages fondus — Détermination de la teneur en
acide citrique — Méthode enzymatique
1 Domaine d'application
La présente Spécification technique internationale spécifie une méthode enzymatique pour la détermination
de la teneur en acide citrique des fromages et des fromages fondus.
2 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente Spécification technique, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
teneur en acide citrique
fraction massique des substances, déterminée selon la méthode décrite dans la présente Spécification
technique
NOTE La teneur en acide citrique est exprimée en pourcentage en masse.
3 Principe
Traitement d’un extrait d’échantillon par les enzymes et les substances biochimiques suivantes:
a) citrate lyase (CL) pour convertir l’acide citrique en oxaloacétate et acétate;
b) malate déshydrogénase (MDH) et lactate déshydrogénase (LDH) en présence de nicotinamide-adénine-
dinucléotide réduit (NADH) pour catalyser la réduction de l’oxaloacétate et de son produit de
décarboxylation, le pyruvate, en L-malate et L-lactate, respectivement, avec la conversion simultanée de
+
NADH en sa forme oxydée (NAD ).
Détermination de la diminution de la concentration de NADH en mesurant l’absorbance de la solution d’essai
à 340 nm. La teneur en acide citrique est proportionnelle à cette diminution de concentration de NADH.
4 Réactifs
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau distillée ou de l’eau de pureté au
moins équivalente, sauf spécification contraire.
4.1 Enzymes
Prendre note de la date de fabrication et de la date limite d’utilisation des réactifs, indiquées par le fabricant.
Si une suspension enzymatique est utilisée pour une autre activité que celle spécifiée, le volume de
suspension indiqué en 8.5.1 doit être augmenté ou diminué en proportion.
Les réactifs décrits de 4.7 à 4.10 inclus sont en vente dans le commerce en combinaison pour essai.
© ISO et FIL 2006 – Tous droits réservés 1
FIL/MR 34:2006
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.