ISO 21528-2:2017
(Main)Microbiology of the food chain — Horizontal method for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae — Part 2: Colony-count technique
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae — Part 2: Colony-count technique
ISO 21528-2:2017 specifies a method for the enumeration of Enterobacteriaceae. It is applicable to - products intended for human consumption and the feeding of animals, and - environmental samples in the area of primary production, food production and food handling. This technique is intended to be used when the number of colonies sought is expected to be more than 100 per millilitre or per gram of the test sample. The most probable number (MPN) technique, as included in ISO 21528‑1, is generally used when the number sought is expected to be below 100 per millilitre or per gram of test sample.
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale pour la recherche et le dénombrement des Enterobacteriaceae — Partie 2: Technique par comptage des colonies
L'ISO 21528-2:2017 spécifie une méthode pour le dénombrement des Enterobacteriaceae. Elle est applicable: - aux produits destinés à l'alimentation humaine et animale, et - aux échantillons d'environnement pour la production au stade primaire, la production des aliments et la distribution des aliments. Cette technique est destinée à être utilisée lorsque le nombre de colonies recherchées est supposé être supérieur à 100 par millilitre ou par gramme d'échantillon pour essai. La technique du nombre le plus probable (NPP), incluse dans l'ISO 21528‑1, est généralement utilisée lorsque le nombre recherché est censé être inférieur à 100 par millilitre ou par gramme d'échantillon pour essai.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 21528-2
Second edition
2017-06
Corrected version
2018-06
Microbiology of the food chain —
Horizontal method for the
detection and enumeration of
Enterobacteriaceae —
Part 2:
Colony-count technique
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode horizontale
pour la recherche et le dénombrement des Enterobacteriaceae —
Partie 2: Technique par comptage des colonies
Reference number
©
ISO 2017
© ISO 2017
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Published in Switzerland
ii © ISO 2017 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
4.1 Preparation of initial suspension and decimal dilutions . 2
4.2 Isolation and selection for confirmation . 2
4.3 Confirmation . 2
4.4 Calculation . 2
5 Diluent, culture media and reagent . 2
6 Equipment and consumables . 2
7 Sampling . 3
8 Preparation of test sample . 3
9 Procedure. 3
9.1 General . 3
9.2 Test portion, initial suspension and dilutions . 4
9.3 Inoculation and incubation . 4
9.4 Counting and selection of colonies for confirmation . 4
9.5 Subculturing selected colonies. 4
9.6 Biochemical confirmation tests . 5
9.6.1 Oxidase reaction . 5
9.6.2 Fermentation test . 5
9.6.3 Interpretation of biochemical tests . 5
10 Expression of results . 5
11 Performance characteristics of the method . 5
11.1 Interlaboratory study . 5
11.2 Repeatability limit . 5
11.3 Reproducibility limit . 6
12 Test report . 6
13 Quality assurance . 7
Annex A (normative) Culture media and reagents . 8
Annex B (informative) Method validation studies and performance characteristics .12
Bibliography .15
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO's adherence to the WTO principles in the Technical
Barriers to Trade (TBT) see the following URL: www .iso .org/iso/foreword .html.
This document was prepared by the European Committee for Standardization (CEN) Technical
Committee CEN/TC 275, Food analysis — Horizontal methods, in collaboration with ISO Technical
Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9, Microbiology in accordance with the
agreement on technical cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 21528-2:2004), which has been
technically revised with the following main changes:
— the confirmation step has been changed by replacing glucose agar by glucose OF medium;
— precision data based on the results of an interlaboratory study using the method according to this
revised edition has been included in an informative annex.
A list of all the parts in the ISO 21528 series can be found on the ISO website.
This corrected version of ISO 21528-2:2017 incorporates the following corrections:
— in 6.4, a water bath capable of being maintained between 44 °C to 47 °C has been added to the list of
equipment;
— in 9.3.2, the temperature has been reduced from “47 °C to 50 °C” to “44 °C to 47 °C”.
iv © ISO 2017 – All rights reserved
Introduction
This document is intended to provide general guidance for the examination of products not dealt
with by existing International Standards and to be taken into account by organizations preparing
microbiological test methods for application to foods or animal feeding stuffs. Because of the large
variety of products within this field of application, these guidelines may not be appropriate in every
detail for certain products, and for some other products, it may be necessary to use different methods.
Nevertheless, it is hoped that in all cases, every attempt will be made to apply the guidelines provided
as far as possible and that deviations from them will only be made if absolutely necessary for technical
reasons.
The main changes, listed in the foreword, introduced in this document compared to ISO 21528-2:2004,
are considered as minor changes (see ISO 17468).
The harmonization of test methods cannot be immediate, and for certain groups of products,
International Standards and/or national standards may already exist that do not comply with this
horizontal method. It is hoped that when such standards are reviewed, they will be changed to comply
with this document so that eventually the only remaining departures from this horizontal method will
be those necessary for well-established technical reasons.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 21528-2:2017(E)
Microbiology of the food chain — Horizontal method for
the detection and enumeration of Enterobacteriaceae —
Part 2:
Colony-count technique
WARNING — In order to safeguard the health of laboratory personnel, it is essential that tests for
detecting Enterobacteriaceae are only undertaken in properly equipped laboratories, under the
control of a skilled microbiologist, and that great care is taken in the disposal of all incubated
materials. Persons using this document should be familiar with normal laboratory practice.
This document does not purport to address all of the safety aspects, if any, associated with its
use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices.
1 Scope
This document specifies a method for the enumeration of Enterobacteriaceae. It is applicable to
— products intended for human consumption and the feeding of animals, and
— environmental samples in the area of primary production, food production and food handling.
This technique is intended to be used when the number of colonies sought is expected to be more than
100 per millilitre or per gram of the test sample.
The most probable number (MPN) technique, as included in ISO 21528-1, is generally used when the
number sought is expected to be below 100 per millilitre or per gram of test sample.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 6887 (all parts), Microbiology of the food chain — Preparation of test samples, initial suspension and
decimal dilutions for microbiological examination
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO 11133, Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and
performance testing of culture media
ISO 18593, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal methods for sampling techniques
from surfaces using contact plates and swabs
3 Terms and definitions
For the purposes of this document
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 21528-2
Deuxième édition
2017-06
Version corrigée
2018-06
Microbiologie de la chaîne
alimentaire — Méthode horizontale
pour la recherche et le
dénombrement des
Enterobacteriaceae —
Partie 2:
Technique par comptage des colonies
Microbiology of the food chain — Horizontal method for the
detection and enumeration of Enterobacteriaceae —
Part 2: Colony-count technique
Numéro de référence
©
ISO 2017
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être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2017 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
4.1 Préparation de la suspension mère et des dilutions décimales . 2
4.2 Isolement et sélection pour confirmation . 2
4.3 Confirmation . 2
4.4 Calcul . 2
5 Diluants, milieux de culture et réactifs . 2
6 Matériel et consommables . 3
7 Échantillonnage . 3
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 4
9 Mode opératoire. 4
9.1 Généralités . 4
9.2 Prise d'essai, suspension mère et dilutions . 4
9.3 Ensemencement et incubation . 4
9.4 Comptage et sélection des colonies pour confirmation . 4
9.5 Repiquage des colonies sélectionnées . 5
9.6 Essais de confirmation biochimiques. 5
9.6.1 Réaction à l'oxydase . 5
9.6.2 Essai de fermentation . 5
9.6.3 Interprétation des essais biochimiques . 5
10 Expression des résultats. 5
11 Caractéristiques de performance de la méthode . 6
11.1 Essai interlaboratoires . 6
11.2 Limite de répétabilité . 6
11.3 Limite de reproductibilité . 6
12 Rapport d’essai . 7
13 Assurance qualité . 7
Annexe A (normative) Milieux de culture et réactifs . 8
Annexe B (informative) Études de validation de la méthode et caractéristiques de performance.12
Bibliographie .15
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre noter des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/patents).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute autre information au sujet de
l’adhésion de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les
obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/foreword .html.
Le présent document a été élaboré par le comité technique CEN/TC 275, Analyse des produits alimentaires
— Méthodes horizontales, du Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le comité
technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie, conformément à l’accord de
coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 21528-2:2004) qui a fait l'objet
d'une révision technique en appliquant les principales modifications suivantes:
— l’étape de confirmation a été modifiée en remplaçant la gélose au glucose par le milieu OF;
— les données de fidélité basées sur les résultats d’un essai interlaboratoires utilisant la méthode
selon la présente édition révisée ont été ajoutées dans une annexe informative.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 21528 est disponible sur le site Internet de l’ISO.
La présente version corrigée de l'ISO 21528-2:2017 inclut les corrections suivantes:
— en 6.4, un bain d’eau réglable entre 44 °C et 47 °C a été ajouté à la liste de matériel;
— en 9.3.2, la température a été réduite de «47 °C à 50 °C» à «44 °C à 47 °C».
iv © ISO 2017 – Tous droits réservés
Introduction
Le présent document est destiné à fournir des directives générales pour l'examen des produits non
concernés par les Normes internationales existant actuellement et devant être prises en considération
par les organismes élaborant des méthodes d'essai microbiologiques applicables aux aliments et
aliments pour animaux. En raison de la grande diversité des produits entrant dans ce domaine
d'application, il est possible que ces directives, dans tout leur détail, ne conviennent pas à certains
produits et que, pour certains autres produits, il soit nécessaire d'employer des méthodes différentes.
Néanmoins, il est à espérer que, dans tous les cas, tous les efforts seront faits pour appliquer, chaque
fois qu'il sera possible, les directives données et qu’il sera fait recours à des dérogations que si cela est
absolument nécessaire pour des raisons techniques.
Les principales modifications, énumérées dans l’avant-propos, introduites dans le présent document
par rapport à l’ISO 21528-2:2004, sont considérées comme mineures (voir l’ISO 17468).
L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut être immédiate et, pour certains groupes de produits, des
Normes internationales et/ou nationales existent peut-être déjà, qui ne concordent pas avec la présente
méthode horizontale. Lorsque de telles normes seront en révision, il serait souhaitable de les modifier
de façon à se conformer au présent document si bien que, au final, les seules divergences restantes par
rapport à la présente méthode horizontale seront celles nécessaires pour des raisons techniques bien
établies.
NORME INTERNATIONALE ISO 21528-2:2017(F)
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Méthode
horizontale pour la recherche et le dénombrement des
Enterobacteriaceae —
Partie 2:
Technique par comptage des colonies
AVERTISSEMENT — Afin de préserver la santé du personnel de laboratoire, il est essentiel que
les essais de recherche des Enterobacteriaceae ne soient réalisés que dans des laboratoires
équipés à cet effet, sous la surveillance d’un microbiologiste expérimenté, et qu’un grand soin
soit apporté à la mise au rebus de tous les éléments incubés. Il convient que les utilisateurs du
présent document connaissent bien les pratiques courantes de laboratoire. Le présent document
n’a pas pour but de traiter de tous les aspects de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son
utilisation. Il incombe à l’utilisateur de la présente norme d’établir des pratiques appropriées en
matière d’hygiène et de sécurité.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode pour le dénombrement des Enterobacteriaceae. Elle est
applicable:
— aux produits destinés à l'alimentation humaine et animale, et
— aux échantillons d'environnement pour la production au stade primaire, la production des aliments
et la distribution des aliments.
Cette technique est destinée à être utilisée lorsque le nombre de colonies recherchées est supposé être
supérieur à 100 par millilitre ou par gramme d'échantillon pour essai.
La technique du nombre le plus probable (NPP), incluse dans l’ISO 21528-1, est généralement utilisée
lorsque le nombre recherché est censé être inférieur à 100 par millilitre ou par gramme d’échantillon
pour essai.
2 Références normatives
Les documents suivants sont réfé
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.